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Schule > Biologie > Grundlagen der Biologie > Wie trennt man Zellorganellen auf?

Zellfraktion – Auftrennung von Zellorganellen

Homogenisierung
Zerkleinerung des Gewebes in einer Pufferlösung bei einem pH-Wert um 7
im Homogenisator (Glasgefäß mit eingeschliffenem Kolben) werden die Zellen schonend aufgebrochen, in den Kolben drehend auf und ab bewegt wird
Zellen platzen zwischen Kolben und Glaswand auf
dünnflüssiger Brei aus unzerstörten Zellen und Zellorganellen- Zellhomogenat wird Weiterverarbeitet
Differentielle Zentrifugation
Zellbestandteile werden in der Zentrifuge getrennt
sie setzen sich während der Zentrifugation in der Reihenfolge abnehmender Größe und Dichte ab
zur Auftrennung wählt man verschiedene Umdrehungsgeschwindigkeiten; dabei auftretende Zentrifugalbeschleunigung werden als Vielfaches der Erdbeschleunigung angegeben; Ultrazentrifugen erreichen z.B. 500000g
damit lassen sich sogar kleine Teilchen wie Proteine sedimentieren
Dichtegradientenzentrifugation
die Probe wird auf einem Dichtegradienten gebracht; das ist eine Lösung von Rohrzucker oder Caesiumchlorid, die mit von unten nach oben abnehmender Dichte in ein Zentrifugenglas eingebracht wird
auf die Oberfläche eines solchen Gradienten bringt man jetzt die Probe des Zellhomogenats und zentrifugiert in der Ultrazentrifuge
die Zellbestandteile sedimentieren jeweils nur so weit, bis sie in die Zone ihrer Dichte gelangen
mit dieser Methode kann man Teilchen gleicher Größe, aber geringerem Dichteunterschied, auftrennen

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